用于NMR結構研究的SHP-2蛋白N端SH2結構域的原核制備

牛皋; 張耀洲

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用于NMR結構研究的SHP-2蛋白N端SH2結構域的原核制備

首發時間：2009-02-04

牛皋 ¹ 張耀洲 ¹

1、浙江理工大學生命科學學院

摘要：SHP-2蛋白是一種含有兩個SH2結構域的磷酸酶，在胚胎發育、血細胞生成和很多生長因子引發的下游通路中起基礎作用，與很多疾病的發生有關。SHP-2的N端SH2結構域是細胞因子或病毒因子激活該蛋白的分子內靶點。對shp2進行信息學分析，設計引物通過PCR克隆出人SHP-2蛋白N端SH2結構域（NSH2）的DNA序列。重組到原核表達載體pGEX-2T中，在大腸桿菌BL21 (DE3)中成功高效率表達了可溶性NSH2蛋白。對蛋白進行15N同位素標記和純化，之后濃縮達到了NMR結構研究實驗的要求。下一步將用于NSH2蛋白與CagA蛋白的滴定NMR結構研究，以從分子結構水平上揭示CagA蛋白的致病機理。

關鍵詞： SHP-2 SH2 蛋白溶解性蛋白穩定性 NMR

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Expression and purification of NSH2 domain of SHP-2 protein for NMR research

Niu Gao ¹ Zhang Yaozhou ¹

1、Zhejiang Sci-Tech University

Abstract：SHP-2 protein, which has two SH2 domains, is essential for the embryonic development, haematopoiesis and signaling downstream of a variety of growth factors. SHP-2 proteins are related to many diseases. To facilitate fundamental studies, it is important that the proteins can be expressed in high quality and in a large quantity. In this work, the amino-terminal SH2 (NSH2) domain of SHP-2 protein which is important for the protein’s self-regulation was recombinated into the prokaryotic expression vector, pGEX-2T, and introduced into E. coli BL21 (DE3) for a prokaryotic expression. The NSH2 protein was labeled with 15N isotope and purified to a high purity. It would be titration with CagA Phosphopeptides for NMR studies.

Keywords： SHP-2 SH2 Protein solubility Protein stability NMR

基金：

1. 國家973資助項目（No.2005CB121006）

論文圖表：

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牛皋，張耀洲. 用于NMR結構研究的SHP-2蛋白N端SH2結構域的原核制備[EB/OL]. 北京：中國科技論文在線 [2009-02-04]. http://www.c1gkrice.com/releasepaper/content/200902-19.

No.2836839417712337****

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論文編號	200902-19
論文題目	用于NMR結構研究的SHP-2蛋白N端SH2結構域的原核制備
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收錄期刊	上傳封面中文期刊英文期刊期刊名稱（中文）期刊名稱（英文）年，卷（）上傳封面中文專著英文專著書名（中文）書名（英文）出版地出版社出版年上傳封面中文譯著英文譯著書名（中文）書名（英文）出版地出版社出版年上傳封面中文論文集英文論文集編者.論文集名稱（中文） [c]. 出版地出版社出版年， - 編者.論文集名稱（英文） [c]. 出版地出版社出版年，- 上傳封面中文文獻英文文獻期刊名稱（中文）期刊名稱（英文）日期-- 在線地址http:// 上傳封面中文文獻英文文獻文題（中文）文題（英文）出版地出版社,出版日期-- 上傳封面中文文獻英文文獻文題（中文）文題（英文）出版地出版社,出版日期--
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